perfusion & fixation

조직관찰엔 세포나 조직을 살아있는 상태에 가까운 것을 관찰할 필요가 있는데, 살아있는 상태의 것을 관찰하는 것에는 한계가 있기 때문에 일반적으로 조직을 고정한 후 적당한 gel 에 포배하고 얇은 절편을 만들어 염색하는 조직표본을 제작한다.

고정(fixation)
조직의 활동을 신속히 차단하여 조직의 damage를 멈추게 하고 염색성을 갖는데 목적이 있다. 일반적으로 고정액에 넣어 구성단백질의 변성과 응고로 고정시킨다. 좋은 고정은 살아있는 상태의 구조 그대로 고정하는 것이다. 크기가 큰 조직편 (장기 와 같은) 은 관류 고정(perfusion fixation)으로 고정한다.

관류 고정(perfusion fixation)
혈관내로 고정액을 주입하는 방법. 크기가 큰 조직편에 사용한다. perfusion fixation은 고속으로 고정이 가능하지만 관류압이 혈관압력에 비해 너무 높으면 조직안으로 RBC가 들어갈 수 있다. 관류는 투입고정보다 더 전문적이고, 별도의 장비를 요구한다. 대부분의 쥐 고정에는 4% paraformaldehyde를 사용한다.

Material and methods
쥐, 해부가위, 주사기,  paraffin aldehyde, tribromo ethanol, PB

tribromo ethanol을 복강주사하여 마취, 주사기를 심장에 꽂고 pb를 주입하여 perfusion 후 paraffin aldehyde로 fixation

Result

내부장기들이 고정액으로 가득 차 팽팽해진 상태로 고정되었다.

Discussion
이번 실험은 perfusion과 fixation으로, RBC나 a.b 와 같은 관찰에 불필요한 것들을 제거하여 관찰하려는 장기를 더 잘볼 수 있게하는 perfusion, 살아있는 장기의 상태와 가장 유사한 장기 상태로 고정하는 과정인 fixation이었다. 먼저 tribromo ethanol (g당 1ml) 을 복강주사하여 마취시켰다. 발가락을 자극하거나 쥐의 고개를 젖혀 보는 등 마취상태를 확인하고, 복부를 절개하고 심장에 주사바늘을 꽂고 pb를 주입하여 혈액을 관류시킨다. 그리고 paraffin aldehyde를 역시 심장에 주사하여 고정시킨다. 심장은 온몸에 분포해 있는 혈관의 중추이기 때문에 심장으로부터 주사한다. paraffin aldehyde로 고정을 하게 되면 전체적 장기의 색이 옅어지고, 사지와 꼬리가 빳빳해지고, 장기들이 팽창된 상태로 고정된다. 이렇게 고정된 쥐의 장기들은 살아있는 상태의 장기의 상태와 상당히 유사하므로 관찰에 용이하다.

Reference
www.abcam.com/techical
조직학/ 고정식/ 고문사/ 1997