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대학 과제 및 리포트/분자생물학 실험-생물학과2

DNA prep, gel electrophoresis, Southern blotting DNA를 분리하고, gel electrophoresis와 Southern blotting을 순서대로 실시했다. 먼저 DNA를 얻기 위해 DNA를 정제했다. E.coli에 Sol I, II, III를 처리하여 세포벽과 세포막을 깨고, 그 외 단백질과 균의 genomic DNA를 제거하고 kit를 이용해 순수하게 plasmid DNA를 분리했고, C.elegans에 위 시약과 유사한 역할을 하는 ATL buffer, proteinase K, AL buffer 등을 통해 단백질, 세포막을 제거하고, 100% ETOH로 DNA를 침전시켜 genomic DNA를 얻었다. 이렇게 순수 분리한 DNA의 size를 알아내기 위해 Agarose gel 전기영동을 실시했다. 전기영동을 하기 전에 cuvette에 100㎕로.. 2010. 4. 18.
DNA Hybridization (DNA 혼성화) 1. DNA Hybridization (DNA 혼성화) 서로 다른 두개의 핵산가닥이 상보적 결합을 형성하는 것 pH, 온도, salt 에 따라 결합되는 정도가 달라진다. 두 가닥내의 인산기 사이에 정전기적 반발이 없어질 정도로 염의 농도가 높아 야 한다. 대개 0.15-0.50M NaCl이 사용된다. 온도는 한 가닥 내에서 이루어지는 임의의 수소결합이 다시 파괴될 정도로 높아야 한다. 그러나 너무 높아서도 안되고, 가닥간의 안정된 염기쌍이 이루어질 정도로 낮아서도 안된다. 재생을 위한 최적온도는 Tm보다 20-25℃ 낮아야 한다. 재생속도는 나선이 다시 꼬이는 시간에 의하여 좌우되는 것이 아니라, 상보적인 두 가닥 사이에서 염기쌍이 정확하게 일어날 수 있도록 두 가닥이 접근할 수 있는 확률에 의존한다. .. 2010. 3. 17.