colony, plaque 차이점, PFU 계산, 염색약( 생염색, vitla dye)

plaque는 바이러스감염에 의해 세포가 용해된곳. 관찰위해 세포 염색을 하면 염색이 안된 부분
colony는 미생물 이 증식하여 육안확인 가능한 미생물집락. 색깔이 있는부분

plaque forming units (PFU).
계산시의 오류를 최소화하기 위하여 여러 희석 배수를 사용하며, plaque가 20-100개정도 형성되는 plate로 count하여 titer를 계산한다.

PFU/mL = Plaque수×희석배수×mL로 환산한 접종량

예) 10-6 희석액 0.1mL에서 50개의 plaque가 관찰되었다면, stock 용액내의 바이러스 역가는 50×106×10 = 5×108 PFU/mL



plaque counting을 더 용이하게 하기 위해 vital dye로 세포단층을 염색한다.
염색약의 종류로는

methylene blue 동물세포의 핵 염색
crystal violet 자주색의 염기성 색소. 주로 그람염색
neutral red 붉은 색의 염기성 색소 니슬 소체 염색, 다른염색약과 대비염색에 주로 사용
Eosin 보편적 헤마톡실린의 대비염색에 사용.  세포질, 세포막을 빨강이나 분홍으로 염색 
bismarck brown solution bismark solution(1g) + 증류수(100cc). 노란색으로 살아있는세포의 세포질 염색. 끓이면 색소가 파괴된다.
Carmine 글리코겐을 붉은색으로 염색

여기서 확실하게 plaque assay에 쓰이는건 methylene blue, crystal violet, neutral red 
다른건 vital dye 이긴 한데.... 실제 쓰이는지는 잘...ㅋㅋㅋ